70水浴的作用及dna提取

　　70水浴的作用dna提取，让水浴加热的目的是为了能让DNA容易分理出来，更好的提取。下面介绍一下70水浴的作用dna提取。

　　70水浴的作用及dna提取1

　　提取rna水浴的作用

　　DNA比RNA稳定很多，一般情况下是很少导致RNA污染的，可能提取过程中低温操作的缘故；可采用室温离心而非4度，RNA自然降解；如果还不行的话，可在操作过程中加入1－2微升的RNase，也无需专门37度水浴，室温操作，问题自然解决。

　　提取dna水浴加热目的

　　温度较高（超过90摄氏度）时，DNA中的氢键会断裂，DNA变成两条核苷酸单链；蛋白质中的肽键在高温水浴中不会断裂

　　rna提取液

　　基于我在读研阶段收集组织标本并从中提取RNA的经验，在术中切除的组织需要立即放入RNA保护液并液氮保存，之后用trizol法液氮研磨提取，基本能保证比较好的RNA质量，如果样本离体以后没有及时置入液氮，则很难保证RNA的质量，你应该知道内源性RNA酶是什么，石蜡切片样本做做免疫组化还可以，提取RNA有点太困难了，一般来说芯片都是用新鲜组织或者细胞做的，从石蜡切片里做能不能有结果另说，肯定会有reviewer质疑的。

　　提取rna水浴的作用是什么

　　水浴加热的目的是为了让DNA分理出来，更好的提取；但这么高的温度不利于下一步的实验，因此需冷却至室温。

　　在提取rna的过程中,为什么沸水浴加热30分钟

　　核苷(Nucleoside)是一类糖苷的总称。核苷是核酸和核苷酸的组成成分。核苷都是由D-核糖或D-Z-脱氧核糖与嘧啶碱或嘌呤碱缩合而成。核苷一般为无色结晶，不溶于普通有机溶剂，易溶于热水，熔点为160~240℃。由D-核糖生成的核苷称核糖核苷，参与RNA组成，由D-α-脱氧核糖生成的'核苷称脱氧核糖核苷，参与DNA组成。

　　提取rna用什么水

　　RNA抽取一般使用Trizol法抽提: Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。 Trizol作用原理: 在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。 水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

　　rna提取depc水的作用

　　溶菌酶比较稳定的，酸碱耐受性都挺好，所以直接用TE溶解就可以了，配成20mg/ml的储存浓度，使用的时候终浓度1-2mg/ml就行了。

　　tris直接用DEPC水配就可以了。

　　提取rna水加多怎么重新沉淀

　　提取基因组dna过程中，如何去除蛋白质，多糖和脂类等生物大分子 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。

　　尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。 DNA 一、材料 水稻幼苗 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离 心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。 三、试剂

　　1、提取缓冲液?：100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。

　　2、提取缓冲液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。

　　3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇

　　4、 RnaseA母液：配方见第一章。

　　5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤：

　　（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取

　　1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?, 60?水浴预热。

　　2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热 的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60?水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。

　　3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。

　　4. 室温下5000rpm离心5分钟。

　　5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。

　　6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。

　　7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60?水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。

　　8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。

　　9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。

　　10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20?放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。

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　　实验十六真核基因组DNA的分离纯化

　　核酸的分离与提取是分子生物学研究中最重要的基本技术之一，核酸样品的质量将直接关系到实验的成败。

　　核酸分离提取的原则

　　核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些噬菌体DNA为单链环状分子；大多生物体内RNA分子均为单链线性分子并具有不同的结构特点，如真核生物mRNA分子多数在3'端带有Poly A 结构。

　　95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。RNA分子主要存在于细胞质中，约占75%，另有10%在细胞核中，15%在细胞器中。

　　分离纯化核酸总的原则：①应保证核酸一级结构的完整性（完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的最基本要求）；②排除蛋白质、脂类、糖类等其它分子的污染（纯化的核酸样品不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂或过高浓度的金属离子，蛋白质、脂类、多糖分子的污染应降低到最低程度；无其它核酸分子的污染，如提DNA分子时，应去除RNA分子。）

　　为保证分离核酸的完整性及纯度，应尽量简化操作步骤，缩短操作时间，以减少各种不利因素对核酸的破坏，在实验过程中，应注意以下条件及要求：①减少化学因素对核酸的降解：避免过碱、过酸对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4~10条件下进行；②减少物理因素对核酸的降解：强烈振荡、搅拌，细胞突置于低渗液中，细胞裂解，反复冻贮等造成的机械剪切力以及高温煮沸等条件都能明显破坏大分子量的线性DNA分子，对于分子量小的环状质粒DNA及RNA分子，威胁相对小一些；③防止核酸的生物降解：细胞内、外各种核酸酶作用于磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构；DNA酶需要Mg2+、Ca2+的激活，因此实验中常利用金属二价离子螯合剂EDTA，柠檬酸盐，可基本抑制DNA酶的活性，而RNA酶，不但分布广泛，极易污染，而且耐高温、耐酸碱，不易失活，所以生物降解是RNA提取过程的主要危害因素。进行核酸分离时最好新鲜生物组织或细胞样品，若不能马上进行提取，应将材料贮存于液氮中或-70℃冰箱中。

　　核酸提取的'主要步骤，无外乎破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其它不需要的核酸分子，沉淀核酸以去除盐、有机溶剂等杂质，最后得到纯化的核酸。

　　应用分子生物学技术分析基因组完整结构和功能，首先必须制备纯化的高分子量DNA，真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都可以用来制备DNA。

　　提取真核基因组DNA的方法由两部分组成：先温和裂解细胞及溶解DNA，使DAN与组蛋白分离，完整地以可溶形式独立分离出来，接着采用化学或酶学方法去除蛋白质、RNA及其它分子。

　　真核细胞的破碎有各种手段，包括超声波、匀浆法、液氮破碎法、低渗法等物理方法及蛋白酶K和去污剂温和处理法，为获得大分子量的DNA，避免物理操作导致DNA链的断裂，一般多采用后者温和裂解细胞。

　　去除蛋白质常用酚、氯仿抽提，反复抽提操作对DNA链机械剪切机会较多，因此有人使用80%甲酰胺解聚核蛋白联合透析的方法，可得>200kb的DNA片段。

　　根据不同的实验要求，可选择不同的实验方法制备真核染色体DNA。

　　方案一组织细胞DNA提取（酚抽提法）

　　【原理】

　　将分散好的真核生物组织、细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质。破坏细胞膜、核膜，SDS 可使组织蛋白与DNA分子分离，EDTA能抑制细胞中DNase的活性，使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中，再用酚、氯仿/异戊醇抽提除去蛋白质，（氯仿可除去DNA溶液中微量酚的污染，异戊醇还可减少蛋白质变性操作过程中产生气泡）得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化，为获得高纯度DNA，操作中常加入RNase除去RNA，此法可获得100~200kb的DNA片段，适用于构建真核基因组文库，Southern blot分析。

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　　dna提取试剂的作用是什么意思

　　植物DNA的提取

　　1、目的要求

　　学习从新鲜的叶片中提取植物总DNA的方法。

　　2、实验原理

　　本实验介绍的就是一种快速简便提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氨中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵（简称CBA,是一种阳离子去污剂)分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与植物多糖等杂质分开。再经氯仿-异戊醇提取去除蛋白，即可得到适合于酶切的DNA。

　　3、试剂和器材

　　一、试剂

　　CTBA抽提缓冲液：2%CTBA.100mmolL Tris-HCl,pH8.0;20mmolL EDTA;1.4molL

　　NaCl;0.2%(vv)巯基乙醇共100mL:称取2 g CTBA,8.18 g NaCI,0.74 g EDTA Na22H20,加入10mL1molL的Tris-HCl,pH8.0,0.2mL的巯基乙醇，加水定容至100mL.

　　TE:TrisEDTA缓冲液：10mmolL Tris-HCl,pH8.0;1mmolL EDTA。

　　异丙醇：乙醇：氯仿一异戊醇(24：1，V:V):液氮。

　　二、材料

　　新鲜植物叶片。

　　三、材

　　研钵：离心机：恒温水浴。

　　4、操作方法

　　1.称取lg新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，将叶片研至粉末。

　　2.将叶片粉末转入一个30mL离心管中。

　　3。加10 mL CTBA抽提缓冲液，轻轻转动离心管使之混匀。于65℃温育10min。加入等体积的氯仿一异戊醇，轻轻颠倒混匀。

　　4.室温下4000rmin离心10min,回收上层水相。在回收的上层水相中。

　　5。加入23体积预冷的异丙醇（预冷至一20℃），轻轻混匀，置冰箱中放置数小时梦至过夜，使核酸沉淀下来。

　　6.室温下4000rmin离心10min。

　　7.小心倒去上清液，用80%乙醇洗涤沉淀物.尽量沥干乙醇，置于真空干燥器内干称重，计算产率。

　　8.将DNA沉淀溶于1mLTE中。

　　dna提取试剂有毒吗

　　核酸提取试剂中的洗脱液的作用是固液分离。收集清液。即为核酸。根据核酸试剂中心文件显示。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物。为生命的最基本物质之一。洗脱液、吸附物和待提取样品混合并反应。得到吸附有核酸的所述吸附物。

　　dna提取液中各成分的作用是什么

　　DNA Wash Buffer 用无水乙醇加水配的 用来洗柱子的buffer HB 应该不是一个盒子的吧?buffer EB 用来洗脱DNA的一般是TE溶液.Solution I 溶解菌体的50mmo1／L 葡萄糖5mmo1／L 三羟甲基氨基甲烷(Tris)Tris?HCl(pH8.0)1.0 mmo1／L 乙二胺四乙酸(EDTA)(pH8.0)Solution II 裂解菌体的0.4mo1／L Na0H,2％SDS(十二烷基硫酸钠),用前等体积混合Solution III 中和液5mo1／L 醋酸钾 60 mL冰乙酸 11.5mL

　　dna提取物

　　黎明觉醒基因系统需要基因药剂和基因序列。因为基因药剂是让玩家获得基因能力的药剂，而基因序列是表示基因能力的序列，两者缺一不可，才能使用黎明觉醒基因系统获得基因能力。此外，黎明觉醒基因系统还需要一定的游戏币作为消耗，玩家需要通过完成游戏任务或者购买游戏币来获取。

　　dna提取试剂盒有哪些

　　根据你扩增的产物情况选择合适分辨率的凝胶浓度,比如：如果你的条带离引物二聚体很远,且比较单一,那可用1%~1.5%的胶即可,可稍微制厚一点,方便点样；如果你的条带只有一两百即离引物二聚体很紧或者非目标条带很多,那你需要浓度稍大一点的胶（3%~5%）,电泳时间长一点,这样可使你的目的条带与非目的.条带分开,方便切胶.

　　胶制好后即可点样,一般会使用宽一点的梳子可使上样量加大,提高回收浓度.点完样后即可开始电泳,电泳结束后,在紫外光仪下条带可显示出来,用薄的锋利的刀片快速将目标条带切下,切胶时要注意：尽量把目标条带切下,尽量包含较少的琼脂糖胶,并切忌将非目的条带切下,还要注意尽量让紫外线照射时间短（因为紫外照射会发生核苷酸变异,产生TT二聚体）.

　　目标条带切下后,可使用专门的琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（很多公司都有）,按照试剂盒的说明书即可回收其中的DNA.

　　dna提取试剂注意事项

　　RNA在细胞内极易降解，样本选择时一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理（液氮速冻）；样本出现多次反复冻融后，RNA得率会严重下降，也会导致RNA降解；RNA提取环境要保持无RNA酶污染；

　　2.RNA容易受到环境污染导致RNA严重降解，建议实验过程中注意更换实验手套，使用所有耗材应该均无RNA酶的一次性耗材；

　　3.试剂盒中BufferEB（RNA专用）中含有少量EDTA，可能影响下游实验，使用时适当稀释，如果用其他洗脱液洗脱，要确保PH>7.5，PH过低影响洗脱效率；

　　4.离心柱漂洗完成后，尽可能烘干柱膜上残留乙醇，残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果；柱膜也不建议过度干燥，没有乙醇味道残留最好，如果过度干燥可能影响RNA溶解；如果A260/230值过低，说明样本提取过程中漂洗不彻底，有盐离子残留，建议增加漂洗次数；

　　5.对于RNA提取，A260/280<1.9说明有可能存在DNA污染或者蛋白污染，如果洗脱样本时没有使用BufferEB，而使用ddH20（确保无RNA酶），比值或偏低，因为Ph值会影响吸光值，并不表示样本纯度低。

　　dna提取液的作用

　　一般是三次离心。

　　第一次离心是在细胞破碎后，目的是除去溶液中的固体杂质。

　　第二次离心是在第一次离心的上清中加入苯酚/氯仿/异戊醇溶液以后，目的是将DNA和蛋白质等杂质分离。

　　第三次离心是在第二次离心的上清中加入氯仿/异戊醇溶液之后，目的是进一步纯化DNA、并除去上一步中引入的苯酚。